GBT 14926.62-2001 实验动物 猴免疫缺陷病毒检测方法.pdf

Ｉ Ｃｓ ６５．０２ ０． ３０ Ｂ４ ４ 署８ 中 华 人 民 共 和 国 国 家 标 准 ＧＢ／ Ｔ１ ４９ ２６１８－１４９ ２６ ．３２ － ２０ ０１ ＧＢ／ Ｔ１ ４９２６ ．５６－１ ４９２ ６．６ ４－ ２ ００１ 实验动物 微生物学检测方法（ ４＞ Ｌａ ｂ ｏｒ ａ ｔ ｏ ｒ ｙａｎｉ ｍａ ｌ － Ｍｉ ｃ ｒ ｏｂｉ ｏ ｌ ｏｇｉ ｃａ ｌｅ ｘａｍｉ ｎａｔ ｉ ｏｎｍｅ ｔ ｈｏｄｓ ２０ ０１一０８一２９发 布 中 华 人 民 共 和 匡 国家 质 量 监 督 检 验 检 疫 总 婿 ２ ００ ２一０５一０１实 施 ＧＢ／Ｔ １４９２６ １ ８ －１ ４９２６ ．３２－ ２０ ０１ ＧＢ／Ｔ １ ４９ ２６ －５ ６－１ ４９ ２６－ ６ ４－２０ ０１ 目 录 ＧＢ／ Ｔ １４９ ２６ ．１ ８ －２ ００ １ 实验动物 淋 巴细胞 脉络丛脑膜炎病毒检测方法 · ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ．１ ＧＢ／ Ｔ １４９ ２６ ．１ ９ －２ ００ １ 实验动物 汉坦病毒 检测方法 · ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ．４ ＧＢ／Ｔ １ ４９ ２６ ．２ ０ －２ ００１ 实验动物 鼠痘 病毒 检测方法 · · · · · · · · · · · · · · · · · · · · · · · · · · · · · · · · · · · · · · · · · · · · · · · · · · · …… ７ ＧＢ／ Ｔ１ ４９ ２６ ．２ １－ ２ ００１ 实验动物 兔 出血症病 毒检测方法 · ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ．１０ ＧＢ／ Ｔ １４９ ２６ ．２ ２－２ ００１ 实验动物 小鼠肝炎病 毒检测方法 · ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ．１ ３ ＧＢ／Ｔ１４９ ２６ ．２ ３ －２ ００ １ 实验动物 仙 台病毒 检测方法 · ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ．１６ ＧＢ／Ｔ １４９２６．２ ４－ ２ ００１ 实 验 动 物 小 鼠肺 炎 病 毒 检 测 方 法 · ． ． ．． ． ．． ． ． ． ．． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ．． ． ．． ． ．． ． ． ． ． ． ． ． ．１ ９ ＧＢ／Ｔ １ ４９ ２６ ．２ ５－２ ００１ 实验动物 呼肠 孤病毒 ｍ型检测方法 · ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ．２２ ＧＢ／Ｔ １ ４９ ２６ ．２ ６－２ ００１ 实验动物 小 鼠脑脊髓 炎病毒检测方法 · ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ．２５ ＧＢ／Ｔ １ ４９ ２６ ．２ ７－２ ００１ 实验动物 小 鼠腺病 毒检测方法 · ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ．２８ ＧＢ／ Ｔ１４９ ２６ ．２ ８－２ ００１ 实验动物 小 鼠细小病 毒检测方法 · ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ．３１ ＧＢ／Ｔ １ ４９ ２６ ．２ ９－２ ００１ 实验动物 多瘤病毒检 测方法 · ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ．３４ ＧＢ／Ｔ１４ ９２ ６． ３０ －２０ ０１ 实验动物 ＧＢ／Ｔ１４ ９２ ６． ３１ －２０ ０１ 实验动物 兔轮状病毒检测 方法 · ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ．３７ 大 鼠细小病毒 （ ＫＲＶ 和 Ｈ－ １株） 检测方法 · ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ．４０ ＧＢ／Ｔ１４ ９２ ６． ３２ －２０ ０１ 实验动物 大 鼠冠状病毒／延泪腺炎病毒检测方法 · ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ．４３ ＧＢ／Ｔ１４ ９２ ６． ５６－ －２０ ０１ 实验动物 狂犬病病毒检测方 法 · ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ．４６ ＧＢ／Ｔ１４ ９２ ６． ５７ －２０ ０１ 实验动物 犬细小病毒检测方 法 · ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ．４９ ＧＢ／Ｔ１４ ９２ ６． ５８ －２０ ０１ 实验动物 传染性犬肝炎病毒 检测方 法 · ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ．５２ ＧＢ／Ｔ１４ ９２ ６． ５９ －２０ ０１ 实验动物 ＧＢ／Ｔ１４ ９２ ６．６ ０ －２０ ０１ 实验动物 犬瘟热病毒检测方 法 · ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ．５５ 琳猴疙疹病毒 １型（ Ｂ病毒 ） 检测方法 · · · · · · · · · · · · · · · · · · · · · · · · …… ５８ ＧＢ／Ｔ１４ ９２ ６． ６１ －２０ ０１ 实验动物 ＧＢ／ Ｔ １４ ９２ ６． ６２ －２０ ０１ 实验动物 猴逆转 Ｄ 型病毒检测方法 · · · · · · · · · · · · · · · · · · · · · · · · · · · · · · · · · · · · · · · …… ６１ 猴免疫缺陷病毒检测方法 · ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ．６ ４ ＧＢ／ Ｔ １４ ９２ ６． ６３ －２０ ０１ 实验动物 猴 Ｔ淋 巴细胞趋向性病毒 Ｉ型检测方法 ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ．６ ７ ＧＢ／ Ｔ１ ４９２６ ．６４－ ２００１ 实 验 动 物 猴痘病毒检测方法 · ． ． ． ． ．． ． ．． ． ．． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ．． ．． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ． ．． ． ．． ． ．． ． ． ． ．７０ Ｇｓ／ Ｔ１ ４９ ２６－ ６２ －２０ ０１ 前 言 本标准规定 了猴免疫缺陷病毒的检测方法 。 猴免疫 缺陷病毒 主要侵害 猴的免疫 系统 ， 引起免疫 器官 的病 变和免疫 机能紊 乱， 从 而干扰实 验研 究， 是普 通级猴和 ＳＰＦ猴 的必检 项 目。因此增加该病毒 的检测 方法 。 本标准 由中华人 民共 和国科学技术部提 出并归 口。 本标准起草单位 ：中国实验动物学 会。 本 标 准 主 要 起 草 人 ：田克 恭 。 中 华 人 民共 和 国 国家 标 准 实 验 动 物 猴 免疫 缺 陷病毒 检测 方 法 ＧＢ／ Ｔ １４ ９２ ６６２ －２０ ０１ Ｌａ ｂｏ ｒ ａｔ ｏ ｒｙａｎｉ ｍａ ｌ－ Ｍｅｔｈｏｄｆｏｒｅｘａｍｉｎａｔ ｉ ｏｎｏ ｆ ｓ ｉｍｉ ａｎｉ ｍｍｕｎｏ ｄｅｆ ｉ ｃｉ ｅｎｃ ｙｖ ｉｒ ｕｓ（ ＳＩ Ｖ） 范围 本标准规定了猴免疫缺 陷病毒（ ＳＩ Ｖ） 的检测方法、试剂等。 本标准适 用于猴 ＳＩ Ｖ 的检测。 ２ 引用标准 下 列标 准所包含的条文 ， 通过在本标准 中引用 而构成 为本标准的条文 。本标准 出版时 ， 所示版本均 为有效 。所 有标准都会被修订 ， 使用本标准 的各 方应探讨 使用下列标准最新版本的可能性 。 ＧＢ／ Ｔ１ ４９２ ６． ５０ －２０ ０１ 实验动物 酶联免疫吸附试验 ＧＢ／ Ｔ１４ ９２ ６． ５２ －２０ ０１ 实验动物 免疫荧光试验 原理 ４ ４１ ４．１ 根据免疫 学原理 ， 采用 ＳＩ Ｖ抗原检测猴 血清中 ＳＩ Ｖ抗体 。 主要试剂和器材 试剂 ＥＬＩ ＳＡ 抗 原 ４ ． １ ． １ ． １特异性抗原： 用Ｓ Ｉ Ｖ感染Ｃ Ｍ－ １ ７ ４ 细胞， 接种１ ０ ＾１ ４ ｄ ， 细胞融合磕 时， 收获培养液。冻融 三次或超声波 处理后 ， 低 速离心去除细胞碎片 ， 上清液再经超速离心浓缩后制成 ＥＬＩ ＳＡ抗原 。 ４． １ ．１． ２ 正常抗原 ： ＣＭ－ １ ７４细胞冻融破碎后 ， 经低速离心去 除细胞 碎片而获得的上清液 。 ４． ，２ 抗原片 ＳＩ Ｖ感染 ＣＭ－１ ７ ４细胞 ， 接种 １ ０－－１ ４ｄ， 病 变达＋＋￣＋＋十时 ， ８ ００ｒ ／ ｍｉ ｎ离心 ５＾－ １ ０ｍｉ ｎ， ＰＢＳ洗 涤， 涂 片。室温干燥的 同时 ， 在紫外线下 ２０ｃ ｍ 处照射 ３ ０ｍｉ ｎ， 冷丙酮 固定 １０ｍｉ ｎ。－２０℃保存 。 ４． １ ．３ 阳性血清 Ｓ Ｉ Ｖ抗 原免疫 的猴血清 。 ４．１ ．４ 阴性血清 无 ＳＩ Ｖ感染 的猴血清 口 ４．１ ．５ 酶结 合物 辣根过氧化物酶标记羊或兔抗猴 Ｉ ｇＧ抗体。 ４１ ． ６ 异硫氰酸荧光素标记羊或兔抗猴Ｉ ｇ Ｇ抗体。 中华人民共和国国家质， 监督检验检疫总局 ２０ ０１一０８－２９批 准 ２０ ０２－０５－０１实施 ６ｓ ＧＢ／Ｔ １４９２６－６２－ ２０ ０１ ４．２ 器 材 ４． ２．１ 酶标仪 。 ４． ２． ２ 荧光显微镜 。 ４．２．３ ３７℃培 养 箱 或 水 浴 箱 。 ５ ５．１ ５．２ 检测方法 采用 ＥＬＩ ＳＡ 方法 （ 见 ＧＢ／ Ｔ１ ４９ ２６ ．５ ０－２ ００１ ）进行血清学检测 。 采用 Ｉ ＦＡ 方法（ 见 ＧＢ／ Ｔ１ ４９ ２６． ５２ －２０ ０１） 进行血清学检测 。 ６ 给果判定 对 阳性检测结 果， 选用 同一种 方法或另一种方法重试 ， 如仍为阳性则判为 阳性 。 结果报告 根据判定结果 ， 作 出报 告 。