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P2 实验室安全规范 神经所实验安全规范 中国科学院神经科学研究所 P2 实验室操作手册 目 录 中国科学院神经科学研究所 P2 实验室操作手册......................................................................... 1 进入规定........................................................................................................................................... 1 人员防护........................................................................................................................................... 2 操作规范........................................................................................................................................... 2 仪器使用........................................................................................................................................... 4 离心机的使用................................................................................................................................... 4 生物安全柜的使用........................................................................................................................... 5 移液管和移液辅助器的使用 ........................................................................................................... 6 废弃物处理....................................................................................................................................... 7 实验操作过程污染物溢出处理 ....................................................................................................... 7 紧急事故处理................................................................................................................................... 8 压缩气体和液化气........................................................................................................................... 9 实验室消防....................................................................................................................................... 9 实验室用电安全............................................................................................................................... 9 （干细胞平台 张敏） 进入规定 1. 该实验室为神经科学研究所操作病毒包装，纯化的场所，需进入 该实验室进行相关实验的人员首先向该实验室的管理人员提出申 请，由管理人员安排相关培训后方可进入实验。 2. 只有经过批准的人员才可进入该实验室工作区域，非实验有关人 员和物品不得进入实验室。 3. 实验室工作人员、外来合作者、进修和学习人员进入实验室参观 学习必须经过相关人员批准，且由准入人员的带领才可进入该实 验室。 4. 实验所用材料，包括细胞株，包装病毒材料需经批准带入该实验 1 P2 实验室安全规范 神经所实验安全规范 室，实验动物不得带入该实验室。 5. 实验记录本等相关实验物品需通过橱窗紫外消毒后才能带入实验 室，带出实验室时必须保证没有收到污染。 人员防护 1. 进入实验室，在入口处换实验服，配戴口罩，帽子、手套和鞋套， 必要时戴安全眼镜，面具或者其他防护设备。 2. 不得在实验室内穿露脚趾的鞋子。 3. 在实验室工作时，任何时候都必须穿工作服。实验过程中可能接 触到感染性材料，必须戴双层手套操作，实验完成后，先消毒再 摘除外层手套，随后必须洗手。 4. 严禁穿实验室防护服离开实验室， （如去餐厅,图书馆，休息室和卫 生间） 5. 禁止在实验室工作区域饮水，进食和处理隐形眼镜。 6. 门禁卡只限本人使用，任何情况不得外借。 操作规范 1. 本实验室的开放时间为早上 9：00，晚上 6：00，周末照常开放。 每天凌晨 5:00 至 6:00 是紫外自动灭菌的时间，请不要安排实验。 2. 本实验室实行预约制度，在进行实验前请先 107 门上的预约表上 2 P2 实验室安全规范 神经所实验安全规范 预约，按照预约时间准时开始实验。 3. 实验开始前，安全柜需经紫外照射 15～30 分钟消毒。 4. 所有接触感染物的操作必须佩带双重手套，穿一次性手术反穿衣， 手离开安全柜前应脱弃外层手套，防止污染安全柜以外区域。操 作者应尽量避免反复移出和伸进手臂。 5. 所有的技术操作要按尽量减少气溶胶和微小液滴形成的方式进 行。 6. 生物安全柜内物品摆放整齐，不得摆放实验无关物品。实验室只 保存满足日常使用量的化学品，化学品不能只按照字母顺序摆放， 而应该按照其相容性放置：如碱金属，如钠、钾、铯以及锂不与 二氧化碳、氯代烃、水一起放置，醋酸、硫化氢、苯胺、烃、硫 酸等不得与氧化剂，如铬酸、硝酸、过氧化物、高锰酸盐放置一 起，以免发生危险。 7. 废弃物的处理严格遵循分类原则。废液置于废液缸中或吸入真空 泵中；与污染物接触的固体废物不得随意丢弃，必须放置于安全 柜中的固体废弃盒中；刀片、注射针头等危险废弃物应弃于专门 的针头废弃缸中，按照相关程序收集集中销毁。各种废弃物严格 分开，不得混放。 8. 实验完成后，所有物品还原至原来位置。安全柜请用酒精擦拭， 物品摆放整齐，紫外消毒 60min，并登记使用记录 9. 实验完成后，实验室需再次经紫外消毒 1h。（步骤：实验间和缓冲 间的紫外现在均由安置在更衣间的自动控制器统一控制，平时我们设置在“自 动”档上，每天早上 5:00-6:00 之间自动开启消毒一小时。病毒浓缩分装后需 3 P2 实验室安全规范 神经所实验安全规范 额外消毒时，只要按动控制器上绿色的键（手动/自动 AUTO/MANU），将 屏幕显示时间下方的黑色箭头调至“开”，紫外灯打开。消毒结束后还是按 绿色的键，请先调至“关”，并记得再按一下，使得箭头指在“自动”档上。 ） 仪器使用 离心机的使用 1. 离心管和盛放离心标本的容器应当由厚壁玻璃制成，或最好为塑 料制品，并且在使用前应检查是否破损。 2. 按照操作指南中给出液面距离心管管口需要留出的空间大小。 3. 离心桶的装载、平衡、密封和打开必须在生物安全柜内进行。套 管拧的时候，切勿拧挂钩处（40s的转头套管更加要注意使用方法， 用白色扳手拧盖子底部，切不可拧挂钩）。 4. 离心桶和十字轴应按重量配对，并在装载离心管后正确平衡。 5. 离心前务必再次检查每个套管是否拧好（圆点对圆点），离心管 盖与离心管套是否一套，对号挂在转头上后要检查是否挂好。 6. 转头放入的时候，一定要手稳，轻轻放入，不能滑下去，砸弯转 轴。 7. 离心机在转速升至1000左右时，会有一个停顿，离心机识别转头 及设定参数；离心机在转速升至4000左右时，会有一个抽真空过 程，请耐心等待；实验操作人员必须等离心机转速达到设定的转 速时方可离开。 8. 转头底部的一圈要保护好，避免碰撞或接触磁性物质；取出转头 4 P2 实验室安全规范 神经所实验安全规范 时一定要轻放放在塑料架子上。 9. 每天最后一个实验者用完离心机后，请按DEF（作用：去除离心机 中的冷凝水，过程约15分钟左右），结束之后（离心机没有声音）， 关闭电源。 10. 每次使用后，要清除离心桶、转子和离心机腔的污染。 11. 离心机出现问题请及时与管理人员联系。 生物安全柜的使用 1.生物安全柜运行正常时才能使用。 2．生物安全柜在使用中不能打开玻璃观察挡板。 3．安全柜内应尽量少放置器材或标本，不能影响后部压力排风系统 的气流循环。 4．安全柜内不能使用酒精灯，否则燃烧产生的热量会干扰气流并可 能损坏过滤器。 5．所有工作必须在工作台面的中后部进行，并能够通过玻璃观察挡 板看到。 6．尽量减少操作者身后的人员活动。 7．操作者不应反复移出和伸进手臂以免干扰气流。 8．不要使实验记录本﹑移液管以及其他物品阻挡空气格栅，因为这 将干扰气体流动，引起物品的潜在污染和操作者的暴露。在生物 安全柜内操作时，不能进行文字工作。 5 P2 实验室安全规范 神经所实验安全规范 9．在安全柜内的工作开始前和结束后，安全柜的风机应至少运行 5min。 10．工作完成后，应将安全柜内物品整理干净，恢复使用前的原样（如 下图所示），并使用酒精对生物安全柜的表面进行擦拭。 移液管和移液辅助器的使用 1. 应使用移液辅助器，严禁用口吸取。 2. 不能向含有感染性物质的溶液中吹入气体。 3. 感染性物质不能使用移液管反复吹吸混合。 4. 污染的移液管应该完全浸泡在盛有适当消毒液的防碎容器中。移 液管应当在消毒剂中浸泡适当时间后再进行处理。 6 P2 实验室安全规范 神经所实验安全规范 5. 盛放废弃移液管的容器不能放在外面，应当放在生物安全柜内。 6. 为了避免感染性物质从移液管中滴出而扩散，在工作台面应当放 置一块浸有消毒液的布或吸有消毒液的纸，使用后将其按感染性 废弃物处理。 废弃物处理 1. 废液置于废液缸中或吸入真空泵中（废液缸及真空泵中应加有 10%的巴斯消毒液） 。 2. 与污染物接触的固体废物不得随意丢弃，必须放置于安全柜中的 固体废弃盒中。 3. 刀片、注射针头等危险废弃物应弃于专门的针头废弃缸中 4. 所有废弃物按照相关程序收集集中销毁。 各种废弃物严格分开，不得混放。 实验操作过程污染物溢出处理 1、戴手套，穿防护服，必要时需进行脸和眼睛防护。 2、用布或纸巾覆盖并吸收溢出物。 3、向纸巾上喷洒适当的消毒剂，并立即覆盖周围区域（通常可以使 用5%漂白剂溶液）。装有消毒剂的喷壶在安全柜右侧地上。 4、使用消毒剂时，从溢出区域的外围开始，朝向中心进行处理。 7 P2 实验室安全规范 神经所实验安全规范 5、作用适当时间后（例如30 min），将所处理物质清理掉。如果含 有碎玻璃或其他锐器，则要使用簸箕或硬的厚纸板来收集处理过 的物品，并将它们置于可防刺透的容器中以待处理。 6、对溢出区域再次清洁并消毒（如有必要，重复第2～5步）。 7、将污染材料置于防漏、防穿透的废弃物处理容器中。 8、在成功消毒后，通知主管部门目前溢出区域的清除污染工作已经 完成。 紧急事故处理 1. P2实验室第二缓冲间内的架子上放有急救箱，内有常用的消毒棉 签，碘伏，眼药水等。若实验中出现意外伤害，紧急处理后请立 刻就医。 8 P2 实验室安全规范 神经所实验安全规范 压缩气体和液化气 1.安全地固定（例如用铁链锁住）在墙上或坚固的实验台上，以确保 钢瓶不会因为自然灾害而移动或者倾倒。 2.钢瓶不应放置在散热器、明火或其他热源或会产生电火花的电器附 近，也不应置于阳光直晒下。 3. 压缩气体钢瓶及其高压阀和减压阀定期进行检查，定期进行维护。 实验室消防 1.消防器材应放置在靠近实验室的门边，以及走廊和过道的适当位 置。 2.灭火器要定期进行检查和维护，使其维持在有效期内 灭火器的类型和用途 种类 可应用于 不能应用于 水 纸、木质纤维 电路和电器火灾、易燃液体、金 属燃烧 CO2 气体灭火 器 易燃液体和气体、碱金属、电 路和 电器火灾 可重复使用的仪器和设备，因为 其残渣 难以清除干净 泡沫 易燃液体 电火灾 实验室用电安全 1. 所有电器设备都必须定期进行检查和测试，包括接地系统。 2. 实验室的所有电器均应接地，最好采用三相插头。 9 P2 实验室安全规范 神经所实验安全规范 3. 在实验室电路中要配置断路器和漏电保护器。断路器不能保护人， 只是用来保护线路不发生电流超负荷从而避免火灾。漏电保护器用于 保护人员避免触电。 10